Étude cinétique du mécanisme catalytique de l’o-diphénol oxydase de truffes de désert

Abstract

Dans ce travail ,la polyphénol oxydase a été extraite a partir de truffe du désert Terfezia Leonis Tul avec un tampon phosphate(pH7-0.05M) contenant 2% de sodium dodecyl sulfate(SDS),l’activité catecholasique a été mesuré par spectrophotometrie en présence de trois substrats phénoliques qui sont :le catéchol(410nm) ,le pyrogallol(420nm), et le 4-méthylcatéchol(400nm),l’utilisation de SDS a augmenté l’activité ainsi que la quantité de protéiné dosées par la méthode de Lowry en utilisant également le spectrophotometre à 760 nm(8.775g/l en présence de SDS ; et 2,72 g/l en absence).L’étude de la stabilité thermique a montré que La polyphénol oxydase est relativement thermostable jusqu’au 60C° au delà de cette température l’enzyme est inactivée, de plus l’effet du pH sur les paramètres cinétiques a été également discutée, un pH optimale vis-à-vis des paramètres cinétiques pour chaque substrat est obtenu catéchol(pH=7,Vmax=99,8Abs/min -Km=5,7),pyrogallol(pH=5.3;Vmax=66,4Abs/min-Km=19,4,4-méthylcatechol(pH=5,Vmax=71,5 Abs/min -Km=0,8873). L’étude de l’effet du pH sur les paramètres cinétiques de l’activité catécholase montre l’existence de deux acides aminés qui sont probablement l’histidine, et l’acide glutamique, dont les valeurs de pK trouvés sont les suivantes :( pyrogallol (5,6-7.6).4-méthylcatéchol (5-6.5 ),catéchol : quatre valeurs ont été trouvés à l’existence de deux isoenzyme (4.6 :5.6 :6.6 :7.3) .D’après, une comparaison entre les deux activités de la polyphenol oxidase de Terfezia leonis Tul(activité catécholase et cresolase) en basant sur les valeurs de pKA des deux groupements ionisables ,on peut suggérer que les deux activités sont effectué par une seule enzyme.